培養(yǎng)小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞需要遵循一系列特定的步驟和注意事項(xiàng)，以確保細(xì)胞的健康生長和實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。以下是培養(yǎng)BV2細(xì)胞的一般步驟：

　　

　　一、準(zhǔn)備階段

　　

　　1、培養(yǎng)基準(zhǔn)備：使用DMEM高糖培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-鏈霉素（P/S）。

　　

　　2、環(huán)境控制：確保培養(yǎng)箱內(nèi)的空氣占95%，二氧化碳濃度為5%，溫度保持在37℃。

　　

　　二、復(fù)蘇階段

　　

　　1、提前將水浴鍋預(yù)熱至37℃，培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫或37℃，離心機(jī)設(shè)置好轉(zhuǎn)速。

　　

　　2、從液氮罐中取出細(xì)胞，迅速搖晃直至融化至米粒大小冰塊時終止水浴，整個過程不超過2分鐘。

　　

　　3、直接將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心2分鐘，棄上清，用預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管，輕柔重懸細(xì)胞后接種至培養(yǎng)瓶中。

　　

　　三、傳代階段

　　

　　1、輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3mL培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面吹下細(xì)胞。

　　

　　2、將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，900rpm離心3-5分鐘，棄上清。

　　

　　3、加新的全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里，補(bǔ)足全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

　　

　　四、凍存階段

　　

　　1、配制程序性凍存液，推薦配方為92%FBS+8%DMSO或92%全培養(yǎng)基+8%DMSO。

　　

　　2、先將細(xì)胞按傳代步驟獲得細(xì)胞沉淀，加入適量程序性凍存液輕輕重懸細(xì)胞，并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管中。

　　

　　3、將凍存管放入程序性凍存盒，放入-80℃冰箱過夜，然后轉(zhuǎn)移至液氮保存并登記細(xì)胞保存位置。

　　

　　總之，培養(yǎng)小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞需要嚴(yán)格控制培養(yǎng)條件、及時處理細(xì)胞狀態(tài)變化，并遵循規(guī)范的操作流程。通過這些措施，可以確保BV2細(xì)胞的健康生長和實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。